1.取100m新鮮植物或25mg乾燥植物
2.將葉片放入研缽中,加入液態氮磨成粉
3.加入1ml PR Buffer & 10ul -Mercaptoethanol 到研缽中,充分研磨。
4.將液體移到tube中,在75C 培養30mins (每10 mins混勻)
5.離心14000g ,4C ,10分鐘 ,將上清液移到新tube中。
6.加入1/2體積的isopropanol到樣本中,且混和均勻。
7.將 RZ column 放入 collection tube中
8.將sample mixture 移到RZ column(最多一次700,超過分兩次),離心14000g ,4C ,30秒
9.去除下層液體
10.加入400ul W1 Buffer
11.離心14000g ,4C ,30秒
12.去除下層液體
13.加入600ul W2 Buffer
14.離心14000g ,4C ,30秒
15.去除下層液體
16.再次離心14000g , 4C ,2mins ,乾燥RE column
17.將RZ column放到新的tube中
18.加入50-90ul 的 Elution Buffer 到 column中心
19.室溫反應2 mins
20.離心14000g , 4C ,2mins
21.保存於-80C /測RNA濃度
